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博格隆(Bestchrom)丨色谱纯化技术在胰岛素制备工艺中的应用

作者:小编 | 发布时间: 2024-11-25 | 次浏览

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。中国糖尿病病人数量在1.1亿左右,其中20%~30%的糖尿病病人需要通过注射胰岛素来控制血糖。  目前胰岛素主要是以基因工程手段合成,再通过一系列方法提纯得到胰岛素产品,这其中色谱技术应用最为广泛。 ...

  糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。中国糖尿病病人数量在1.1亿左右,其中20%~30%的糖尿病病人需要通过注射胰岛素来控制血糖。

  目前胰岛素主要是以基因工程手段合成,再通过一系列方法提纯得到胰岛素产品,这其中色谱技术应用最为广泛。

  胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受一些物质刺激而分泌的一种蛋白质激素。这些物质可以是内源性的,也可能是外源性的,比如胰高血糖素、核糖、乳糖、精氨酸等。胰岛素是通过促进糖原、脂肪及蛋白质的合成而降低血糖浓度,并且是机体内唯一一种可以降低血糖的激素。

博格隆(Bestchrom)丨色谱纯化技术在胰岛素制备工艺中的应用(图1)

博格隆(Bestchrom)丨色谱纯化技术在胰岛素制备工艺中的应用(图2)

  1)动物胰岛素:从猪和牛的胰腺中提取,两者药效相同,但与人胰岛素相比,猪胰岛素中有1个氨基酸不同,牛胰岛素中有3个氨基酸不同,因而易产生抗体。

  2)半合成胰岛素:将猪胰岛素第30位丙氨酸,置换成与人胰岛素相同的苏氨酸,即为半合成人胰岛素。

  3)重组人工胰岛素:利用生物工程技术获得的高纯度的生物合成人胰岛素,其氨基酸排列顺序及生物活性与人体本身的胰岛素完全相同。

  综上可见,第三种方法是目前最好的方法,副作用最小,而且简单安全。所以本篇文章针对重组人工胰岛素的制备做了以下研究。

  无色杆菌(Achromobacter Lyticus)蛋白酶可特异性催化胰岛素B链羧基末端(第30位上)的氨基酸置换反应,由猪胰岛素第30位上的丙氨酸(Ala)变为人胰岛素的苏氨酸(Thr)。在无色杆菌蛋白酶的作用下,首先将猪胰岛素B30位上的丙氨酸(Ala)水解除去,生成去丙氨酸-B30的猪胰岛素,在同一酶的作用下使之与苏氨酸丁酯偶联,然后用三氟乙酸(TFA)和苯甲醚除去丁醇即得人胰岛素。

  以人工合成的人胰岛素A链和B链基因分别与半乳糖苷酶基因连接,形成融合基因,分别在大肠杆菌中表达A链和B链,然后再通过化学氧化作用,通过二硫键连接起来。

博格隆(Bestchrom)丨色谱纯化技术在胰岛素制备工艺中的应用(图3)

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博格隆(Bestchrom)丨色谱纯化技术在胰岛素制备工艺中的应用(图4)

  通过胰岛素原的cDNA合成,表达产物是胰岛素原,经工具酶切开,除去C肽,得到人胰岛素。

  [4] 钟松阳,胡婕,祝素文. 胰岛素产品咨询中常见问题及对策[J]. 中国临床药学杂志,2011, 20(2): 119-121.

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